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更新时间:2024-10-31
兔肝窦内皮细胞
商品属性:
组织来源 | 产品规格 | 细胞形态 | 货号 |
肝脏 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 内皮细胞样 | YS-01X8010 |
细胞简介:
兔肝窦内皮分离自肝脏组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官,又是新陈代谢的重要器官。肝脏在机体位置和形态结构:肝脏位于右上腹,隐藏在右侧膈下和肋骨深面,大部分肝为肋弓所复盖,仅在腹上区、右肋弓间露出并直接接触腹前壁,肝上面则与膈及腹前壁相接。肝窦内皮细胞(SEC)是肝脏内所占比例最高的非实质细胞,位于肝窦腔与肝细胞之间,具有物质转运、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。SEC由于拥有一般细胞所没有的窗孔结构、细胞间连结松散、内皮下缺少基底膜而使其具有高度通透性,从而达到快速交换各种大小分子的目的。肝在遭到多种病原侵袭时,肝窦内皮细胞窗孔逐渐减少或消失,内皮下基膜形成,产生类似于连续型毛细血管的结构,这一过程称为肝窦毛细血管化。它由多种因素引起,其过程极复杂,在多种肝病的发病前期阶段均有出现,近年来受到广泛关注。
方法简介:
实验室分离的兔肝窦内皮采用混合酶灌流消化、反复低速离心、密度梯度离心法,并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。
质量检测:
实验室分离的兔肝窦内皮经CD31或CD14免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:
包被条件:PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%)
培养基:含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率:每2-3天换液一次
生长特性:贴壁
细胞形态:内皮细胞样
传代特性:可传1-2代
消化液:0.25%
培养条件:气相:空气,95%;CO2,5%
兔肝窦内皮体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
细胞传代及冻存:
细胞传代步骤 | 细胞冻存步骤 |
如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 | 待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面T25瓶为例; 1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,细胞变圆脱落后,加入2ml培养基终止消化,可使用血球计数板计数。 2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 |
原代细胞的培养方法一般有以下4种:
① 组织块培养法
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中,瓶壁可预先涂以胶原薄层,以利于组织块粘着于瓶壁,使周边细胞能沿瓶壁向外生长。
② 消化培养法
③ 悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞,如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化,可采用低速离心分离,直接培养,或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。
④器官培养
器官培养是指从供体取得器官或组织块后,不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养,器官培养可保持器官组织的相对完整性,可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响,以及局部环境的生物调节作用。
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原代细胞的培养条件:
一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养
1、细胞要通过充分漂洗,以尽量除去消化液的毒性;
2、细胞接种时浓度要稍大一些,至少为5×108细胞/L;
3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养;
4、 胎牛血清浓度为10%-80%
5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养;
6、在起始的2天中尽量减少振荡,以防止刚贴壁的细胞发生脱落,漂浮;
7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状,应将原代细胞换液;
8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时,应将细胞悬液经低速离心后换液。
二、悬浮细胞培养
1、原代培养时要尽量去除红细胞;
2、短期培养,可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行;
3、细胞浓度可在5-8×109/L范围内,进行分瓶试验;
4、长期培养时,淋巴细胞中要加入生长因子,白血病细胞中要加入少量的原患者血清,以利细胞生长;
5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次;
6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。
水饱和酚 10x250ml
Phenol,WaterSaturated,pH5.3
0酰二肽 10x250ml
Phosphoramidon
豚鼠乙型肝病毒表面抗体(HBsAb)试剂盒 ,英文名: HBsAb ELISA Kit
Human protein tyrosine phosphatase (PTP/PTPase/CD148) ELISA Kit 人蛋白酪0酸酶(PTP/PTPase/CD148)试剂盒
MonkeyEndothelin1,ET-1ELISAKit内皮素1(ET-1)试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforBMP-4ELISAKit大鼠骨成型蛋白4
细菌明胶琼脂平板50个
rabbitmaixmetalloproteinase4,MMP-4ELISAKit兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)试剂盒规格:96T/48T
J-chain重组兔单克隆抗体
激活素受体相互作用蛋白4抗体
AMIGO2重组人 AMIGO2 蛋白 Protein
streptomycin/BSA 偶联牛血清白蛋白 2mgstreptomycin/BSA 偶联牛血清白蛋白
TACSTD2重组人 TROP2 / TACSTD2 蛋白 Protein
IGFLR1 Protein Human 重组人 IGFLR1 / TMEM149 蛋白 (Fc 标签)
TGFBR2 Protein Human 重组人 TGFBR2 蛋白 (His & Fc 标签)
streptomycin/BSA 偶联牛血清白蛋白 2mgstreptomycin/BSA 偶联牛血清白蛋白
IGFLR1 Protein Human 重组人 IGFLR1 / TMEM149 蛋白 (Fc 标签)
AMIGO2重组人 AMIGO2 蛋白 Protein
TGFBR2 Protein Human 重组人 TGFBR2 蛋白 (His & Fc 标签)
TACSTD2重组人 TROP2 / TACSTD2 蛋白 Protein
兔肝窦内皮细胞大鼠末端补体复合体C5b-9(C5b-9)试剂盒 ,英文名: C5b-9 ELISA Kit
Monkey ierleukin 1 (IL-1) ELISA Kit白介素1(IL-1)试剂盒
RatComplemefragme4a,C4aELISAKit 大鼠过敏毒素/补体片断4a(C4a)试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforA1cELISAKit大鼠糖化血红蛋白A1c
细胞甘油-3-0酸脱氢酶(Glycerol-3-PhosphateDehydrogenase)总活性比色法定量试剂盒20次
RatsolubleFactor-relatedApoptosis,sFAS/Apo-1ELISAKit大鼠可溶性凋亡相关因子(sFAS/Apo-1)试剂盒规格:96T/48T