大鼠毛囊干细胞

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更新时间：2024-10-29

大鼠毛囊干细胞

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细胞简介：

大鼠毛囊干分离自皮肤毛囊组织；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头，中心是一根毛发，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下组织中，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织。毛囊干细胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一种细胞。毛囊干细胞属于成体干细胞，在体内处于静止状态，在体外培养作用下表现出惊人的增殖能力。研究发现，毛囊干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，参与皮肤创伤愈合的过程。毛囊干细胞和其它成体干细胞一样，具有慢周期性、未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。毛囊干细胞分化经毛囊干细胞（hair follicle stem cells，FSC）、短暂增殖细胞（transit amplifying cells，TAC）有丝分裂后分化细胞（postmitotic differentiating cells，PDC）三个阶段。毛囊干细胞在光镜下呈立方形，细胞体积小，核浆比率大，表面光滑，皱褶少，又被称为非锯齿形细胞，细胞体积的增大与增殖能力呈负相关。超微结构显示细胞表面有少许微绒毛，细胞核存在许多卷曲，染色质弥散分布，这些形态特征均表现出原始细胞的特性。

原代细胞的培养条件：

　　一、静置贴壁细胞(包括半贴壁细胞的培养)培养

　　1、细胞要通过充分漂洗，以尽量除去消化液的毒性；

　　2、细胞接种时浓度要稍大一些，至少为5×108细胞/L；

　　3、培养基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培养；

　　4、 胎牛血清浓度为10%-80%

　　5、应在37℃5% CO2的培养箱中培养；

　　6、在起始的2天中尽量减少振荡，以防止刚贴壁的细胞发生脱落，漂浮；

　　7、待细胞基本贴壁伸展并逐渐形成网状，应将原代细胞换液；

　　8、用骨髓或外周血中的悬浮细胞经静置培养1周时，应将细胞悬液经低速离心后换液。

　　二、悬浮细胞培养

　　1、原代培养时要尽量去除红细胞；

　　2、短期培养，可在含10%小牛血清的RPMI1640培养基中进行；

　　3、细胞浓度可在5-8×109/L范围内，进行分瓶试验；

　　4、长期培养时，淋巴细胞中要加入生长因子，白血病细胞中要加入少量的原患者血清，以利细胞生长；

　　5、细胞换液一般每隔3天需半量换液一次；

　　6、细胞传代一般待细胞增殖加快、细胞密度较高时才能进行。

方法简介：

实验室分离的大鼠毛囊干采用胶原酶 - 联合消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：

实验室分离的大鼠毛囊干经CD34免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

培养基：基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%

培养条件：气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠毛囊干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞传代及冻存：

原代细胞的培养方法一般有以下4种：

　　① 组织块培养法

　　组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。

　　② 消化培养法

　　③ 悬浮细胞培养法

　　对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。

　　④器官培养

　　器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。

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