白介素27ELISA试剂盒的详细操作步骤是怎样的！

　　白介素27ELISA试剂盒的操作步骤：

　　1、标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀;然后从第孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/L，15 ng/L)。

　　2、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、温育:用封板膜封板后置38℃温育30分钟。

　　4、配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

　　5、洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6、加酶:每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7、温育:操作同3。

　　8、洗涤:操作同5。

　　9、显色:每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

　　10、终止:每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11、测定:以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。