大鼠骨骼肌组织提取物​操作流程

大鼠骨骼肌组织提取物操作流程：

1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：

1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。

1.2.2 细胞传代 原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。

1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。

1.4 细胞的计数 常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4) ×104。

1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100％，计算贴壁率。 

1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。

ME-180(人子宫颈表皮癌细胞)

MFC(小鼠胃癌细胞)

MG-63(人骨肉瘤细胞)

MGC80-3(人胃癌细胞)

MLTC-1(小鼠睾丸间质细胞瘤细胞)

Molt-4(人急性淋巴母细胞白血病细胞)

MRC-5(人胚肺成纤维细胞 )

MS1(小鼠胰岛内皮细胞)

MSTO-211H(人肺癌细胞)

NAMALWA(人Burkitt's淋巴瘤细胞)

NCI-H1299(人非小细胞肺癌细胞)

NCI-H1650(人非小细胞肺癌细胞)

NCI-H292(人肺癌细胞)

Neuro-2a/N2a(小鼠脑神经瘤细胞)

NCI-N87(人胃癌细胞)

NG108-15(小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞)

NIH/3T3(小鼠胚胎细胞)

NR8383(大鼠肺泡巨噬细胞)

NRK(大鼠肾细胞)

NRK-52E(大鼠肾小管导管上皮细胞)

OK(负鼠肾小管细胞)

OP9(小鼠骨髓基质细胞)

OS-RC-2(人肾癌细胞)

OVCAR-3(人卵巢癌细胞)

P19(小鼠畸胎瘤细胞)

P388D1(小鼠淋巴样瘤细胞)

P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤细胞)