EHA101 电击感受态细胞操作规程

EHA101 电击感受态细胞操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

小鼠血小板生成素(mouse TPO)

小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(mouse TRAIL/APO 2L)

小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(mouse TRAIL R1)

小鼠凝血酶敏感蛋白-1(mouse TSP-1)

小鼠血栓调节蛋白(mouse TM)

小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(mouse uPA)

小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(mouse uPA-R)

小鼠血管细胞粘附分子-1(mouse sVCAM-1)

小鼠血管内皮生长因子(mouse VEGF)

小鼠血管内皮细胞生长因子B(mouse VEGF-B)

小鼠血管内皮细胞生长因子C(mouse VEGF-C)

小鼠血管内皮细胞生长因子D(mouse VEGF-D)

小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(mouse VEGF-R1)

小鼠血管活性肠肽(mouse VIP)

小鼠血管性血友病因子(mouse VWF)

小鼠血管内皮生长因子受体-2(mouse VEGF R2)

小鼠软骨糖蛋白39(mouse YKL-40)