猴子热休克蛋白糖蛋白96试剂盒操作步骤

猴子热休克蛋白糖蛋白96试剂盒操作步骤 

    实验开始前，请提前配制好所有试剂；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，均应用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。建议各实验室在操作前先进行预实验以建立佳稀释倍数。 
    1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul，余孔分别加标准品或待测样品100ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。 
    为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 
    2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100ul（在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。 
    3. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。 
    4. 每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100ul，37℃，60分钟。 
    5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350ul/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。 
    6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。 
    7. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。 
    8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后立即进行检测。